突变蛋白在血小板中的研究

作者：孟媛 北京市朝阳区六里屯社区卫生服务中心(北京城建老年病医院)

Franke等人研究了4个常见的突变体的尾部结构域组装成双极细丝。在所有的病例中，尽管这些突变的程度不同，但这些突变都与线圈-线圈结构或二聚体侧向关联的缺陷相关。最重要的是，即使混合了突变体和野生型蛋白，组装也存在缺陷，这表明了突变体的显性负效应。

此外，体外研究表明，NMMHC-IIA头部结构域的两个替换破坏了蛋白质的功能的p。R702C突变体具有25%的atp酶活性，其肌动蛋白丝的移动速度为野生型的一半。N93K的突变更为显著，因为该突变体的atp酶活性仅为野生型的4%，且没有转移肌动蛋白丝。作者认为，突变体分子与野生型肌凝蛋白分子共聚合成细丝，发挥了显性的负效应。同样的研究也表明，N93K突变体在纯化过程中和纯化后均有在溶液中聚集的倾向。有趣的是，D1424H突变体，无论是单独还是与野生型NMMHC-IIA共转染的细胞系中，形成了包含两种蛋白形式的聚集物。

总的来说，头部结构域的变化会不同程度地影响NMMHC-IIA水解ATP并沿着肌动蛋白滑动的能力，而尾部结构域的突变会不同程度地改变分子的构象和形成细丝的能力。无论它们的位置如何，这些突变都会产生显性负效应，使分子的可溶性较低，容易形成聚集体。

患者细胞造血谱系的研究。在患者造血谱系中的表达研究得出结论，突变蛋白在血小板中不表达或表达，而在巨核细胞（Mks）中减少。由于mRNA是稳定的，很可能是突变体蛋白质被降解，这表明至少在血小板中有一种与单倍体不足相关的致病机制。然而，在来自同一患者的中性粒细胞中，突变蛋白聚集成一些野生型蛋白。这种“诱捕”效应，与在共转染突变型和野生型构建物的细胞系中观察到的效果类似，支持了突变的显性负效应的假说。值得注意的是，尽管不同的作者在其他血细胞中寻找NMMHC-IIA聚集物，除了粒细胞外，它们从未在其他元素中被鉴定出来。总之，这些研究表明，突变的NMMHC-IIA在不同的造血谱系中被不同的处理，并表明相同的MYH9突变在不同的细胞类型中通过单倍性不足或显性负效应起作用。

在目前的血小板生物发生模型中，Mks从骨髓增殖成骨细胞生态位中的造血干细胞分化而来，然后迁移到血管空间，在那里它们延伸原血小板，并将新生的血小板直接释放到血液中，这一过程受到Mks与骨髓细胞外基质不同成分的相互作用的调节。特别是，Mks通过a2b1整合素与I型胶原蛋白的相互作用抑制了促血小板的形成。Rho-Rho相关激酶-肌凝蛋白调节轻链肌凝蛋白II通路。有研究推测，巨核细胞通过a2b1整合素与I型胶原相互作用导致非肌球蛋白II调节轻链磷酸化，进而抑制血小板前释放。由于干细胞生态位中富含I型胶原，这一机制在巨核细胞到达血管生态位之前阻止了促血小板的延伸。I型胶原的抑制作用在MYH9-RD中消失，有人认为早期和离域的血小板释放导致MYH9-RD中血小板计数较低。

以及rho激酶ROCK，它能磷酸化NMMHC-IIA的调节轻链的rho激酶ROCK。I型胶原是成骨细胞生态位中丰富的细胞外蛋白，可以阻止Mks在该空间中血小板的过早释放。与此模型一致的是，从D1424N或p。R1933X突变甚至在与I型胶原粘附时也形成了原血小板，这表明MYH9-RD血小板减少症源于异位血小板释放，导致血小板产生无效。此外，MYH9-RD Mks扩展的前血小板表现出明显的形态学异常，如前血小板尖端数量减少和大小增大，这两个方面可能与血小板减少和血小板巨细胞增多直接相关。考虑到Mks的分化和成熟在其他方面是正常的，NMMHC-IIA突变，至少是在尾部区域的突变，通过影响成熟Mks血小板释放的后期过程导致大血小板减少

据报道，与MYH9- RD相关的突变损害了自然杀伤淋巴细胞的体外细胞毒性活性。然而，目前尚不清楚MYH9-RD患者是否存在先天免疫系统的临床相关缺陷。肾脏，内耳和晶状体。MYH9-RD中白内障的发病机制尚完全未知，关于肾脏损害和听力损失的机制的信息有限。