血清学检测

作者：张树和 北京大学首钢医院
一、血清丙酮酸测定：线粒体病是由于线粒体功能障碍所导致的一组临床疾病，主要表现为肌肉和(或)脑部的症状，因此可分为线粒体肌病和线粒体肌脑病。大多数忠者可伴有乳酸酸中毒和血丙酮酸异常。1.检测方法 我院采用 2，4-二硝基苯肼显色法。取无蛋白血上清液 2m，加入2，4 二硝基茉肼 0.7m，静止 10 分钟，加入二甲苯 2m，用力摇匀后将下部沉淀分离液弃去，加入 10%碳酸钠液 4mL，摇匀后取下部水样液 2mL,加1.5M氢氧化钠混匀显色。正常值为:1.5~2.1mmol。2.临床意义 线粒体病患者在运动后血乳酸升高，但丙酮酸水平变化不大，因而乳酸内酮酸比值变化较大，正常情况下乳酸/内酮酸值在 4~17 之间，超过此值为异常，这是筛选线粒体病最敏感的指标。
二、血清抗乙酰胆碱受体抗体测定抗乙酰胆碱受体抗体(anti-AchR-ab)和突触前膜抗体(PrM)是重症肌无力诊断的重要指标。其测定借用不同类型蛇毒对 AchR和 PrM的选择性结合，通过 ELISA法，可分别测定其血清浓度。a银环蛇毒素(a-BGT)与 AchR 特异性结合，B-银环蛇毒素(B-BGT)与 PrM 特异性结合。所以，在测定前包被酶标板时，加入a-BGT，测定的是抗AchR抗体，加入B-BGT时，测定的是抗 PrM抗体。
1.测定方法 日前我院采用 ELISA方法。采用骨骼肌提取液作为粗抗原，再测定血清抗AchR 抗体和抗 PrM 抗体。
将α-BGT 或β-BGT用pH 9.5的碳酸缓冲液稀释至 2m，加入酶标板，每孔100μ1，4℃过夜，封板。加粗提抗原 100μ1，37℃ 2小时，洗净，拍干，加原待测血清，37℃孵育1小时，洗净，拍干，加入辣根过氧化酶羊抗人 IgG，孵育 30 分钟后加入底物显色，以2M 硫酸终止反应。测 OD值为P值，正常血清 OD值为N值，计算 P/值，抗触前膜抗体(PrM)正常值为小于2，抗突触后膜抗体(anti-AchR-ab)为小于 1.5。2.临床意义 重症肌无力患者血清抗乙酰胆碱受体抗体的阳性率为33%~88%。全身型患者阳性率在 80%以上。血清抗乙酰胆碱受体抗体浓度与预后及疾病严重程度无明显相关性。某些其他自身免疫性疾病也可出现抗体阳性。三、血清 Titin 抗体测定Titin 是与肌肉基本结构、功能以及发育相关的大型纤维样肌肉蛋白。它是骨骼肌和心肌肌节中第三大蛋白质,约占肌纤维重量的 10%,是目前所发现的最大的单链蛋白。由 27000个氨基酸组成，分子量为 3000kDa，在肌纤维中起着蛋白构建、维持静止张力与拉长弹性等作用。Titin 的主要免疫原区蛋白为MGT-30，80%~90%的合并胸腺瘤的重症肌无力患者的
血清中可检测到抗 Titin 抗体。1.测定方法 用 EUSA 诊断试剂盒进行测定:取 96 孔酶标板加重组 MGT-30 抗原(10μg/nd)，4℃过夜，甩干后加入1:10稀释的待检血清100μ1，37℃温箱中孵育2小时，再加1:1000 HBP-SPA，孵育 30 分钟，甩干后加1:20 TMB 显色，15 分钟后加 2M 硫酸终止反应。在酶标仪上测定波长 450nm 处的吸光度，所得值除以阴性对照值，即为待测标本的 Titin 抗体P/N值。测定结果以试剂盒设定P/N≤1.99为阴性。
2.临床意义 主要用于重症肌无力及胸腺瘤的诊断。四、血清铜氧化酶吸光度测定
铜氧化酶是一种含铜的蓝色蛋白，95%的血铜存在于该中，测定其活性称之为铜氧化酶吸光度测定。
1.测定方法 我院采用盐酸对苯二胺方法，取血清 0.1mL 加入盐酸对苯二胺、醋酸钠缓冲液、氮化钠、氯化钠等混匀用 EUSA 诊断试剂盒进行测定:取 96 孔酶标板加重组 MGT-30 抗原(10μg/nd)，4℃过夜，甩干后加入1:10稀释的待检血清100μ1，37℃温箱中孵育2小时，再加1:1000 HBP-SPA，后，用 721 分光光度计测定 OD 值，正常值为 0.12~0.50。2.临床意义 肝豆状核变性患者血铜氧化酶吸光度下降。
五、血清抗 Hu 抗体、抗 Yo 抗体和抗 Ri 抗体
1.Ri 抗体测定 肿瘤能够在无转移的情况下影响远隔器官的功能称为癌的远隔效应，也称副肿瘤综合征。Hu、Yo和Ri抗原在副肿瘤综合征选择性表达，抗体可出现在一些副肿瘤病人的血清和脑脊液中，多见于小细胞肺癌、卵巢腺癌和乳腺癌。2.方法 间接免疫荧光法及免疫印迹法。
3.临床意义 抗Hu、Yo及 Ri 抗体可特异性出现在一些副肿瘤综合征患者中(详见下表检测这些抗体对肿瘤的早期诊断及神经系统疾病的鉴别诊冇积极意义。表1 副肿瘤综合征抗 Hu、